Tretja e kufizuar realizohet nga inkubimi i molekulës së synuar të ADN-së me enzima kufizuese - enzima që njohin dhe lidhin sekuenca specifike të ADN-së dhe çahen në nukleotide specifike brenda sekuencës së njohjes ose jashtë të sekuencës së njohjes.
Si treten enzimat kufizuese?
Protokolli i tretjes së enzimës kufizuese
- Shto komponentë në një tub të pastër në rendin e treguar: …
- Inkuboni reaksionin në temperaturën e tretjes (zakonisht 37 °C) për 1 orë.
- Ndaloni tretjen me çaktivizimin e nxehtësisë (65 °C për 15 minuta) ose shtimin e 10 mM të përqendrimit përfundimtar EDTA.
A e tret ADN-në enzima kufizuese?
Enzimat kufizuese mund të përdoren gjithashtu për të gjeneruar përfundime të pajtueshme në produktet PCR. … Në të gjitha rastet, një ose më shumë enzima kufizuese përdoren për të tretur ADN-në që rezultonnë futje jo-drejtuese ose të drejtuar në plazmidën e përputhshme.
Si funksionojnë enzimat kufizuese të ADN-së?
Si funksionojnë enzimat kufizuese? Ashtu si të gjitha enzimat, një enzimë kufizuese funksionon nga përputhja e formës me trajtën Kur bie në kontakt me një sekuencë të ADN-së me një formë që përputhet me një pjesë të enzimës, të quajtur vendi i njohjes, ajo mbështillet rreth ADN-së dhe shkakton një thyerje në të dy vargjet e molekulës së ADN-së.
Cila enzimë tret ADN-në?
Këto enzima quhen endonukleaza kufizuese ose enzima kufizuese, dhe ato janë në gjendje të çajnë molekulat e ADN-së në pozicionet në të cilat janë të pranishme sekuenca të veçanta të shkurtra bazash.
