Vortexing nuk do ta presë ARN-në tuaj për ta bërë atë të papërdorshme nëse jeni duke bërë RT priming të rastësishëm - vetëm nëse dëshironi të klononi mRNA të gjatë. Mbështetja teknike e Invitrogen është gjithashtu e saktë. Kloroformi është më i rëndë se Trizoli dhe do të zhytet në fund të tubit.
A është e sigurt të vorbullohet ARN?
Mos i vorbulloni lizatat e Trizolit ose mostrat e ARN-së për të shmangur prerjen. Pas nxjerrjes, mbajini mostrat e ARN-së në akull gjatë gjithë kohës. Ky protokoll është krijuar për mostrat e lizuara 1 ml Trizol në një tub 1,5 ose 2 ml.
A mund ta ngrohni ARN?
Prandaj, shmangni temperaturat e larta ( mbi +65°C) pasi ato ndikojnë në integritetin e ARN-së. Në vend të kësaj, për të shkrirë strukturat dytësore, ngrohni ARN-në në +65°C për 15 minuta në prani të tamponëve denatyrues.
Si i risuspendoni peletat ARN?
risuspendoni peletin tuaj me ujë të ngrohtë (40-50 gradë celcion). inkubohen në 45 gradë celc për 10 minuta. vendosini ato në +4 për 4-6 orë.
Si e precipitoni ARN?
A.
Pasi të jetë rregulluar përqendrimi i kripës, ARN mund të precipitohet duke duke shtuar 2,5 vëllime etanol ose 1 vëllim izopropanol dhe duke e përzier plotësisht, e ndjekur nga ftohja për të paktën 15 minuta në -20°C.
