Cila është mënyra më e mirë për të ndarë kloroplastet nga buferi?

2024 Autor: Fiona Howard | [email protected]. E modifikuara e fundit: 2024-01-10 06:43

Për të mundësuar nxjerrjen e pigmenteve nga kloroplastet pezullohen në një tampon izolues. Për të qenë në gjendje të nxjerrim pigmentet nga kloroplastet, së pari duhet të heqim qafe buferin. Cila është mënyra më e mirë për të ndarë kloroplastet nga buferi? përdor një centrifugë për të ndarë

Si e izoloni një kloroplast?

Në metodën e izolimit të kloroplastit, muri qelizor thyhet mekanikisht duke përdorur një blender ose homogjenizues. Pastaj indi i pathyer i gjetheve dhe mbeturinat qelizore hiqen me anë të filtrimit. Kloroplastet mblidhen me centrifugim duke përdorur një gradient percoll.

Si e bëni një tampon izolimi të kloroplastit?

Përgatitni sasinë e kërkuar të tamponit të izolimit 1X të kloroplastit duke holluar stokun tampon 2X 1:1 me ujë dH2O Shtoni 10 µL tretësirë 10% BSA për mL 1X kloroplast Tampon izolimi. Pak përpara përdorimit, shtoni 1 µL DTT për 1 mL bufer izolimi të kloroplastit. Etiketojeni këtë tampon si "Bufer i plotë ".

Çfarë është në një tampon izolimi kloroplast?

buferi i izolimit të ADN-së përbëhej nga 100 mM NaCl, 100 mM Tris-HCl (pH 8.0), 50 mM EDTA dhe 1 mM DTT Liza e kloroplastit u përftua duke inkubuar pelet kloroplast me 8 ml tampon izolimi të ADN-së, 1,5 ml 20% SDS, 20 μl 2-merkaptoetanol dhe 30 μl Proteinazë K (10 mg/ml) në një tub centrifuge në 55°C për 4 orë.

Cili është pH i tamponit të përdorur për të homogjenizuar gjethet e spinaqit në protokollin e izolimit të kloroplastit?

Spinaqi është i mbushur me kloroplaste të mira dhe ato izolohen lehtësisht. Ju duhet t'i vendosni gjethet në një blender të ftohtë me tampon fosfati 0,1 M, pH 7,5 dhe 0,5M saharozë për t'i mbajtur ato të mos shpërthejnë.