Logo sq.boatexistence.com

Pse qelizat kompetente duhet të mbahen në akull?

Përmbajtje:

Pse qelizat kompetente duhet të mbahen në akull?
Pse qelizat kompetente duhet të mbahen në akull?

Video: Pse qelizat kompetente duhet të mbahen në akull?

Video: Pse qelizat kompetente duhet të mbahen në akull?
Video: The Choice is Ours (2016) Official Full Version 2024, Mund
Anonim

Mbajini të Ftohtë! Procesi i krijimit të qelizave kompetente është sfidues për shkak të nevojës që qelizat të qëndrojnë të ftohta. Kjo është thelbësore sepse qelizat janë aq të ndjeshme dhe të brishta ndërsa po bëhen kompetente Mbajtja e temperaturës së ulët ndihmon në shmangien e vdekjes së qelizave gjatë përpunimit.

Pse mbahen reagimet në akull gjatë eksperimentit të transformimit?

Përzierja plazmide-qelizë më pas nxehet shkurtimisht në 45-50°C, duke lejuar që ADN-ja të hyjë në qelizë përmes membranës së çrregulluar. Përzierja e ngrohur më pas vendoset përsëri në akull për të mbajtur plazmidet brenda baktereve … Nëse tretësira e ADN-së plazmidike ka shumë kripë në të, mund të ndodhë hark, duke kompromentuar transformimin.

Pse i vendosni tubat në akull?

Pse mendoni se i vendosim tubat në akull? Për të futur ADN-në në bakteret, duhet të hapim vrima në to me klorurin kimik të kalciumit (CaCl2). … Vrimat u hapën për të lejuar hyrjen e ADN-së, duke i lënë bakteret të rrjedhin. Nëse nuk i mbajmë në akull, ata do të 'rrjedhin gjak' deri në vdekje.

Cili është roli i klorurit të kalciumit të ftohtë në akull në përgatitjen e qelizave kompetente?

Procesi i transformimit të goditjes nga nxehtësia e klorurit të kalciumit inkurajon qelizat bakteriale të thithin ADN-në nga mjedisi përreth. … Tretësira e CaCl2 e ftohtë në akull lehtëson lidhjen e ADN-së në sipërfaqen e qelizës, e cila më pas hyn në qelizë pas një periudhe të shkurtër goditjeje nga nxehtësia (3).

Si i ruani qelizat kompetente?

Qelizat kompetente duhet të ruhen në - 80°C. Ruajtja në -20°C do të rezultojë në një ulje të ndjeshme të efikasitetit të transformimit (TE). Kur u testua në NEB 5-alfa Competent E. coli (NEB C2987H), qelizat humbën 94,5% të TE pas vetëm 24 orësh ruajtje në -20°C.

Recommended: